實驗原理：

瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可以形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。

DNA分子在堿性緩沖液中帶負電荷，在外加電場作用下向正極泳動。

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時，有電荷效應與分子篩效應。不同DNA的分子量大小及構型不同，電泳時的泳動率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。

實驗步驟：

1. 配膠 首先根據(jù)DNA片段大小確定瓊脂糖凝膠濃度，稱取相應質量的瓊脂糖粉末于TAE/TBE緩沖液中溶解，微波加熱1min左右取出（時間根據(jù)體積改變），加入Gelred染料，搖晃均勻后倒入模具。

注：緩沖液為三乙酰-乙二胺四乙酸（EDTA）（TAE）或三硼酸-EDTA（TBE），三酸溶液是微堿性條件下的有效緩沖液，可保持DNA去質子化并溶于水。EDTA是一種螯合劑，能使可能損害被分析的DNA的核酸酶失活。

表1 DNA片段大小與瓊脂糖凝膠濃度的關系

2、凝膠澆注

選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳齒。輕柔地將加了染料的瓊脂糖凝膠溶液倒入模具中，觀察有無氣泡產生，在膠未全部凝固的時候戳破，否則會影響最終結果。注：速度不可太快，否則容易出現(xiàn)氣泡。

3、將樣品與DNA loading buffer混合

將樣品與含溴酚藍的loading buffer混合，loading buffer可以幫助我們觀察樣品的位置。

4、凝膠裝入

待膠變硬，直到呈乳白色且不透明（約20-30 min），小心地垂直拔出梳齒，將膠塊放入電泳槽中，確?？孜挥谪撾姌O（一般為黑色），將運行緩沖液（TAE或TBE）注入槽中，使凝膠被淹沒1-2 mm。用移液器向泳道中加樣，不要超過泳道載量，否則樣品會溢出。

5、凝膠運行

確保電極沒有插反，否則樣品會跑到緩沖液中。設定凝膠運行的時間和電壓，調節(jié)電壓至4-5V/cm，DNA從負極移到正極，電泳時間30-60 min，具體根據(jù)凝膠比例和片段大小進行調整（一般120V，35 min即可）。電泳結束后，拔掉電源。

常見問題分析：

1.加樣孔有熒光

（1）提DNA時有蛋白質殘留。

（2）基因組DNA，如果使用普通的瓊脂糖電泳，往往不能電泳出孔，滯留在加樣孔中產生熒光。

2.條帶扭曲呈波浪狀

（1）配制凝膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配制的。

（2）電泳時電壓過高?？梢栽陔娪厩?5分鐘用較低電壓（3 V/cm），等條帶出孔后，再調電壓。

（3）慢慢加樣，等樣品自然沉降后再加電壓。

3.條帶彌散

（1）DNA發(fā)生降解。

（2）電泳緩沖液陳舊（根據(jù)DNA Maker對照，觀察是否為電泳體系的問題）。

（3）PCR過程產生非特異性的擴增 （使用特異性較高的引物）。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩(wěn)定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產品和物流服務。 專業(yè)的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術支持，隨時為客戶提供服務。