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    細(xì)胞污染如何識別?

    發(fā)布時間: 2022-11-01  點(diǎn)擊次數(shù): 1289次

    在培養(yǎng)細(xì)胞過程中,同學(xué)們最擔(dān)心的就是細(xì)胞污染。因此,今天給大家分享如何辨別細(xì)胞污染的經(jīng)驗(yàn),趕快學(xué)起來吧~


    一、肉眼觀察

    把培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿拿起來,對者光線檢查

    ●渾濁情況:即使細(xì)胞密度很高,培養(yǎng)基也應(yīng)該是透明的。輕輕移動或晃動培養(yǎng)瓶,觀察培養(yǎng)基的渾濁或懸浮情況,一些霉菌可能會在培養(yǎng)基的表面形成菌落。

    ●培養(yǎng)基顏色的變化。酸性條件下,加了酚紅的培養(yǎng)基會由紅變黃,而堿性條件下會變成紅紫色。細(xì)菌污染常常會使培養(yǎng)基變成黃色,真菌污染會使培養(yǎng)基變成深紫紅色。

    注意:丟掉細(xì)胞以前要仔細(xì)檢查一下,快速生長和生長過量的細(xì)胞培養(yǎng)基也會變黃。當(dāng)培養(yǎng)箱中CO2的濃度變化時培養(yǎng)基的顏色也會變成黃色(CO2濃度太高)或是粉紅色(CO2 濃度太低)。

    ●聞!當(dāng)然不能打開瓶子去聞,把鼻子貼在瓶口聞,許多污染發(fā)生以后都會散發(fā)出易察覺的、特殊的氣味,甚至打開培養(yǎng)箱門就聞到了。


    二、顯微觀察

    在倒置顯微鏡下,先用低倍(10x)再用高倍(40x)物鏡(總放大倍數(shù)為400)觀察細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞:

    ●其他有機(jī)體:在低倍鏡下,真菌的菌絲體成長棒狀,并橫穿整個視野,還可以觀察到酵母,有時呈小圓球形,有時還有芽。

    在高倍鏡下可以觀察到細(xì)菌,它們可能是棒狀或球狀,單獨(dú)成鏈或成團(tuán)存在,它們也可能和細(xì)胞混在一起,并且明顯處于細(xì)胞內(nèi)部,有些細(xì)胞可能已經(jīng)裂解變得模糊。觀察時可能每兩個視野才出現(xiàn)一個污染(當(dāng)然也算被污染了?。?,而且可能污染物是可以運(yùn)動的。

    ●損傷細(xì)胞:感染會殺死細(xì)胞,可能導(dǎo)致每個細(xì)胞都裂解/細(xì)胞層從附著物上全剝離,更可能的是細(xì)胞變得不規(guī)則(或大或?。诘捅剁R下是黑色的粒狀。

    (1)懸浮細(xì)胞

    懸浮培養(yǎng)細(xì)胞比貼壁培養(yǎng)細(xì)胞更加難以顯微觀察,尤其是高倍顯微鏡下。

    ●將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放在顯微鏡的載物臺上,靜置一會。將焦距對準(zhǔn)器皿的底部,觀察那些輕微附著的細(xì)胞,因?yàn)樗鼈兛赡芤呀?jīng)接觸到了微生物。

    ●對準(zhǔn)整個培養(yǎng)瓶焦距, 當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的時候,用細(xì)聚焦調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)節(jié),仔細(xì)檢查周圍的培養(yǎng)基有沒有污染發(fā)生。

    (2)貼壁細(xì)胞

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    三、制片觀察法

    如果你不能確定是否發(fā)生了污染

    ●制作濕涂片或染色片:取1 ml培養(yǎng)基離心,用50μl培養(yǎng)基或緩沖液重新懸浮細(xì)胞,滴一滴到載玻片,蓋上蓋玻片制成濕涂片;或涂片、固定并染色(甲基蘭或革蘭氏染液),在高倍鏡下觀察。

    ●將細(xì)胞在營養(yǎng)培養(yǎng)基或血瓊脂培養(yǎng)基上劃線,37℃培養(yǎng)3天。如果有菌落,那么細(xì)胞被污染了。

    ●取1 ml的細(xì)胞培養(yǎng)液至無菌的微量離心管中,37℃培養(yǎng)3天。觀察到渾濁物,做濕涂片顯微鏡觀察。


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