-
細(xì)胞周期檢測(cè)（流式細(xì)胞術(shù)）
發(fā)布時(shí)間： 2022-10-18 點(diǎn)擊次數(shù)： 2430次原理
流式細(xì)胞周期檢測(cè)是一種常見(jiàn)的檢測(cè)細(xì)胞增殖情況的方法之一，細(xì)胞在不同周期時(shí)，其內(nèi)的DNA含量不同。碘化丙啶（PI）作為一種核酸嵌入型染料，能夠進(jìn)入固定后的細(xì)胞中，與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合，其熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度，從而判定不同組別中細(xì)胞周期發(fā)生的變化。
用途
檢測(cè)不同組別或處理對(duì)某種細(xì)胞周期的改變。
材料與儀器
【器材】
流式細(xì)胞儀、移液器、槍頭、離心管、離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、水浴鍋、流式管、濾頭；
【試劑】0.25％ 胰蛋白酶溶液、PBS、RNA酶、PI染液、70％ 乙醇溶液（建議提前放入負(fù)二十預(yù)冷）；步驟
1.以腫瘤細(xì)胞為例，將正常生長(zhǎng)的對(duì)照或處理組腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)，每組取2×105-3×105個(gè)細(xì)胞鋪板，待細(xì)胞貼壁后，將正常培養(yǎng)基替換為無(wú)血清1640培養(yǎng)基，同步化20 h，使得所有細(xì)胞都進(jìn)入相同的細(xì)胞周期時(shí)期；同步完后，將培養(yǎng)基重新替換為正常含血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h；2.用不含EDTA的胰酶將細(xì)胞消化，收集細(xì)胞，300 g，離心3 min；用吸引器去除培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次，再次300 g，離心3 min；去除PBS，用提前預(yù)冷的70%酒精重懸細(xì)胞沉淀，4℃固定過(guò)夜；3．4℃，1000 g，離心3-5 min，去除酒精，用PBS清洗3遍，最后一遍去除PBS；加入300 μL PBS，輕輕吹打，重懸細(xì)胞沉淀，加入相應(yīng)量的Rnase至終濃度100 μg/mL，37 ℃水浴鍋中消化30 min；4．上機(jī)前加入PI（5 mg/mL）至終濃度50 μg/mL，避光孵育15 min；孵育完后，過(guò)300目細(xì)胞篩，上機(jī)檢測(cè)；5.分析數(shù)據(jù)。注意事項(xiàng)
1. PI為致癌物質(zhì)，避免用手直接接觸。
2. 細(xì)胞數(shù)目應(yīng)該達(dá)到2x104個(gè)，細(xì)胞數(shù)目過(guò)少影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.鋪板的細(xì)胞數(shù)量以收獲細(xì)胞時(shí)有足夠的生長(zhǎng)空間來(lái)動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，現(xiàn)在的流式細(xì)胞儀靈敏度很高，不需要太多的細(xì)胞。4. 在制備時(shí)，要清洗干凈酒精，特別注意清洗過(guò)程中細(xì)胞的損失。離心次數(shù)不宜過(guò)多，防止細(xì)胞丟失。5. 可以用未處理的細(xì)胞調(diào)試流式細(xì)胞儀。6.胰酶不加EDTA常見(jiàn)問(wèn)題
Q:酒精固定后細(xì)胞難以沉淀下來(lái)，導(dǎo)致細(xì)胞丟失較多；
A:可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速。
以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
- 下一篇：細(xì)胞增殖分析（CCK-8 法）
- 上一篇：原代細(xì)胞培養(yǎng)
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測(cè)
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測(cè)系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫(kù)
-
蛋白研究系列
