香港特级三a毛片免费观看,免费a级毛片出奶水,两个奶头被吃高潮视频,久久综合九色欧美综合狠狠

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——胰酶消化法

    大鼠肝星狀細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——胰酶消化法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-04  點(diǎn)擊次數(shù): 1786次

    材料與儀器

    SD大鼠
    戊巴(匕匕)妥鈉 小牛血清 DMEM 酶消化液 D-Hanks' 液 酚紅 臺盼蘭 HBSS 氯化鈉 PBS
    手術(shù)刀 手術(shù)剪 尼龍網(wǎng) 相差顯微鏡 熒光顯微鏡

    步驟


    一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

    1.  動(dòng)物:雄性SD大鼠(體重250-450 g)。
     
    2.   試劑:戊巴(匕匕)妥鈉,小牛血清(或胎牛血清,則更好),DMEM,酶消化液I、Ⅱ(以HBSS配),18% Nycodenz(以GBSS配),D-Hanks' 液(KCl 0.4 g/L,KH2PO4 0.06 g/L,NaCl 8.0 g/L,NaHCO3 0.35 g/L,Na2HPO4·7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 0.053 g/L,可加酚紅 0.02 g/L),HBSS,臺盼蘭等。
     
    3.  器械:手術(shù)器械,200目尼龍網(wǎng),相差顯微鏡,熒光顯微鏡。
     
    二、原代培養(yǎng)方法
     
    1.  大鼠腹腔麻醉后在超凈臺上剖腹,進(jìn)行門靜脈插管,以D-Hanks'液灌注,同時(shí)剪開下腔靜脈,沖掉血液后,改灌以100 ml酶消化液I(0.05% IV型膠原酶)。

    2.  待肝臟變軟后,離體肝臟并剪碎,繼續(xù)以酶消化液II(含20 U/ml DNase I的0.05% IV型膠原酶)消化15 min,尼龍網(wǎng)過濾后以450 g 離心5 min(4℃,下同)。

    3.  以HBSS重懸沉淀至10 ml,再混以20 ml Nycodenz液,分置于離心管中,并分別覆以2-3 ml HBSS,1450 g離心16 min后取界面細(xì)胞。

    4.  以HBSS重懸后再次離心收集細(xì)胞,以DMEM重懸后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),并判斷存活率和產(chǎn)量,最后按照常規(guī)方法接種(105細(xì)胞/cm2),次日換液,以后每2-3天換液一次。
     
    三、傳代方法

    棄去培液后以D-Hanks'液洗兩次,加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化,鏡下觀察細(xì)胞突起回縮(2-5 min左右),以*培液(DMEM+10% NBS)終止反應(yīng)(若不用EDTA,可以不需離心),充分吹打后以1:2-1:3接種,然后繼續(xù)培養(yǎng)(5%CO2,37℃)。
     
    四、 結(jié)果
    接種次日,光鏡下可見細(xì)胞呈星芒狀,胞質(zhì)內(nèi)有脂滴,熒光鏡下328 nm處見自發(fā)熒光。附上發(fā)表于Biochem Biophys Res Commun 2004年文章的照片(圖1)。


產(chǎn)品中心 Products
日本亚洲精品无码区国产电影| 精品人妻无码一区二区三区手机版| 国产山东48老熟女嗷嗷叫白浆| 欧美人体艺术视频| 中文字幕一区二区人妻| 色欲无码国产喷水av精品| 99久久国产综合精品麻豆| 欧洲人妻丰满AV无码久久不卡| 老年人做爰片免费观看| 亚洲欧美国产精品专区久久| AV无码精品一区二区三区四区| 精品人妻人人做人人爽夜夜爽 | 英语课代表哭着说太深了视频| 锕锕锕锕锕锕锕WWW在线观看| 欧洲精品一卡2卡三卡4卡影视| 樱花草WWW日本在线观看| 欧美人体艺术网| 被三个男人绑着躁我好爽视频 | 老湿机香蕉久久久久久| 国产精品18久久久久久| 亚洲av无码一区二区三区电影| 久久久亚洲欧洲日产国码aⅴ| 最新中文字幕av专区| 一区二区三区内射美女毛片| 亚洲日本一期二期三期精华液| 亚洲国产av无码精品无广告| 少妇bbw搡bbbb搡bbbb| 青草国产精品久久久久久| 亚洲午夜精品a片久久www慈禧| 亚洲欧美熟妇综合久久久久久| 婷婷久久香蕉五月综合加勒比| 国产手机精品一区二区| 欧美性69式xxxx护士| 最近中文字幕高清中文字幕mv| 日产精品一线二线三线区| 国产福利视频在线观看| 人妻少妇AV中文字幕乱码| 午夜福利视频| 亚洲AV无码不卡| 欧美大成色WWW永久网站婷| 亚洲国产成人a片乱码|