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    簡單實用的原代細胞培養(yǎng)方法

    發(fā)布時間: 2021-09-28  點擊次數(shù): 1288次

    很多老師在設(shè)計科研實驗的時候都會很迷茫,到底用什么細胞好?越來越多的老師開始傾向于原代細胞的科研實驗,在設(shè)計實驗中,原代細胞和細胞株到底該怎么選擇呢?


    原代細胞的定義:

    原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì),如果是正常細胞,仍然保留二倍體數(shù)。但實際上,我們通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。


    原代細胞因為可以模擬機體的功能,主要用于:生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究

    下面我們整理了一些培養(yǎng)原代細胞的小知識:

    細胞復(fù)蘇

    原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴鍋中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養(yǎng)箱中,使用cell systems的原代細胞時,復(fù)蘇的時候不建議離心,第二天換個液就可以。


    細胞傳代

    原代細胞有間隙抑制接觸不良反應(yīng),所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代,一般*的建議觀察細胞的生長周期,Cell Systems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代最佳,當生長至100%匯合時,它就會衰老。記住,所有的原代細胞不是100%純,因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶,也可以嘗試下cellsystems的整體消化套裝哦(品牌:cell systems,貨號:4Z0-800)并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。


    細胞凍存

    通常我們不推薦重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓T毎浅C舾?,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。

    與細胞系不同,原代細胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài),因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。


    正常的原代細胞培養(yǎng),在無污染的情況下,建議培養(yǎng)基中不加抗體,抗體會影響細胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)有差異,所以cell systems的細胞在分離提取時就考慮到這點,他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時,通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度,這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確。

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