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    一句話知曉實(shí)驗(yàn)方法怎么選?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-09-08  點(diǎn)擊次數(shù): 1705次

    在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的玩法,無(wú)非就是用某種特定的刺激物(如細(xì)胞活素)去刺激一些細(xì)胞或組織,讓它們 high 起來(lái),然后分析細(xì)胞對(duì)這些外源刺激物的反應(yīng),檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)哪條信號(hào)通路被激活或失活,或者什么蛋白被分泌出來(lái)。這里面就有很多種方法,哪種最合適,關(guān)鍵看你要檢測(cè)這個(gè)反應(yīng)的哪個(gè)方面的特性。

    WB 

    建立蛋白質(zhì)的個(gè)人檔案 

    一個(gè)典型的免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot,WB)可檢測(cè)信號(hào)通路中某種蛋白質(zhì)的特性、表達(dá)和分布,分析容量大、敏感度高、特異性強(qiáng)。但至于蛋白-蛋白相互作用則要用另一種更復(fù)雜的方法,即免疫共沉淀法( Coimmunoprecipitation,Co-IP),它接近細(xì)胞內(nèi)的生理情況,是以成為經(jīng)典方法。

    SPR 

    想知道 Ta 和 Ta 能有多親密? 

    表面等離子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)除了研究蛋白-蛋白相互作用(例如受體-配體相互作用),還有可研究小分子-蛋白或細(xì)胞-蛋白的相互作用。這種方法不需要標(biāo)記蛋白(熒光標(biāo)記或同位素標(biāo)記),還可以實(shí)時(shí)定量分析這些相互作用的親和力、熱力學(xué)、動(dòng)力 學(xué)特性。SPR 是分析動(dòng)力學(xué)和親和力的金標(biāo)準(zhǔn)。

    這些分析用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(EenzymeLinked ImmunosorbentAssay,ELISA)也可以做,原理差不多。

    PCR 

    把小樹養(yǎng)大才能更好地招風(fēng) 

    轉(zhuǎn)錄因子激活并和靶基因結(jié)合之后,該基因就被激活。PCR(Polymerase Chain Reaction)或Real Time PCR 可以把特定的 DNA 序列大幅擴(kuò)增,便于檢測(cè)活性基因的表達(dá)情況。

    ELISA 

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    如果要看看細(xì)胞外如何,比如細(xì)胞培養(yǎng)上清液或體液中的某種蛋白質(zhì)分泌情況,則通常選用 ELISA,從而獲知相應(yīng)基因的活性。


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